Липидный состав активного ила

Липидный состав активного ила

Содержание

Цена:

Авторы работы:

Научный журнал:

Год выхода:

Текст научной статьи на тему «ЛИПИДНЫЙ СОСТАВ АКТИВНОГО ИЛА ПИЛОТНОЙ УСТАНОВКИ АНАЭРОБНОГО ОКИСЛЕНИЯ АММОНИЯ»

ПРИКЛАДНАЯ БИОХИМИЯ И МИКРОБИОЛОГИЯ, 2013, том 49, № 5, с. 481-490

ЛИПИДНЫЙ СОСТАВ АКТИВНОГО ИЛА ПИЛОТНОЙ УСТАНОВКИ АНАЭРОБНОГО ОКИСЛЕНИЯ АММОНИЯ

© 2013 г. М. Н. Козлов, М. В. Кевбрина, А. Г. Дорофеев, Е. А. Казакова, В. А. Грачёв, Д. Ю. Поляков, В. Г. Асеева, Ю. А. Николаев

ОАО "Мосводоканал", Москва Поступила в редакцию 12.02.2013 г.

Исследован липидный состав микробного сообщества активного ила пилотного реактора, осуществляющего анаэробное окисление аммония (процесс анаммокс) на Курьяновских очистных сооружениях (г. Москва). Основная часть жирнокислотного состава (95%) представлена традиционными жирными кислотами С^—С^ как нормального, так и изостроения. В биомассе активного ила установлено наличие липидов, содержащих т.н. ладдерановые вещества ("лестничные" спирты и жирные кислоты), характерные для анаммокс-бактерий: С20-[3]-ладдерановый и С20-[5]-ладдера-новый спирты, С18- и С20-[3]-ладдерановая и С^- и С20-[5]-ладдерановые кислоты. Кроме того, в нативном (негидролизованном) экстракте обнаружены простые и сложные эфиры этих веществ с остатками фосфохолина, фосфоэтаноламина, фосфоглицерина. Для некоторых соединений получены и публикуются впервые спектры электронного удара и тандемной масс-спектрометрии.

Бактерии — основные участники самой масштабной биотехнологии — очистки сточных вод, которая в ее современном виде, с использованием активного ила, создана 100 лет назад [1]. Развитие этой биотехнологии связано с успехами микробиологии и биохимии. Одной из недавно открытых и только внедряемых в настоящее время биотехнологий удаления азота из воды является процесс анаэробного окисления аммония — анаммокс (anaerobic ammonia oxidation), открытый в 90-х годах прошлого века [2]. В этом процессе аммоний окисляется нитритом микроорганизмами, входящими в группу Planctomycetes и обладающих рядом уникальных физиологических и морфологических признаков. Процесс анаммокс обнаружен во многих экотопах — в очистных сооружениях, в заболоченных почвах, в морях и океанах, в том числе — в арктических [2—4]. Технология на основе автотрофного удаления азота представляет собой комбинацию двух процессов: частичной нитрификации, в ходе которой половина аммония окисляется до нитрита, и анаэробного окисления аммония нитритом (собственно процесс Anam-mox). Технология анаммокс реализована на немногих очистных сооружениях Европы, Азии и США. ОАО Мосводоканал в настоящее время проводит первые в России полупромышленные испытания этой технологии. Испытания прошли стадии получения накопительной культуры анам-мокс-бактерий и лабораторного реактора [5.] В настоящее время функционирует пилотная установка производительностью 900 л/сут, очищаю-

щая фильтрат, получаемый от сгущения сброженного осадка [6].

Важной характеристикой любых микроорганизмов является их липидный состав. У анаммокс-бактерий обнаружены уникальные липиды — т.н. ладдерановые (лестничные) липиды (от англ. ladder — лестница), в составе которых имеются сконденсированные циклобутановые структуры [7].

Цель работы — исследование липидного состава активного ила биореактора, осуществляющего анаэробное окисление аммония.

Активный ил пилотного реактора, осуществляющего анаэробное окисление аммония в фильтрате сброженного осадка сточных вод Курьяновских очистных сооружений г. Москвы [6], обладающий высокой анаммокс-активностью, собирали отстаиванием в течение 1 ч, центрифугировали (1000 g, 5 мин) для отделения избыточного количества воды и использовали для исследования липидов.

Подготовка образцов для анализа. Липиды экстрагировали двумя способами. Способ 1. К осадку после центрифугирования (5 мл) добавляли 5 мл смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1 : 1 [8], встряхивали 2 мин в закрытой пробирке и переносили в стеклянный центрифужный стаканчик. Нижний слой после центрифугирования (1000 g, 5 мин) собирали в чистую емкость. Процедуру экстракции той же порции

2.6e+07 2.4e+07 2.2e+07 2.0e+07 1.8e+07 1.6e+07 1.4e+07 1.2e+07 1.0e+07 0.8e+07 0.6e+07 0.4e+07 0.2e+07

Рис. 1. Хроматограмма метиловых эфиров жирных кислот активного ила.

осадка повторяли и объединяли две порции нижних слоев жидкости, после чего их упаривали досуха под азотом при комнатной температуре. Способ 2. К осадку после центрифугирования (5 мл) добавляли 5 мл метанола, встряхивали 2 мин в закрытой пробирке и центрифугировали (1000 g, 5 мин). Супернатант отбрасывали, осадок экстрагировали дважды 5 мл метил-трет-бутилового эфира (МТБЭ) при обработке ультразвуком в ультразвуковой бане Bransonic 1510 ("Branson" США) в течение 5 мин, после чего упаривали экстракт досуха под азотом при комнатной температуре.

Получение метиловых эфиров жирных кислот. К

упаренному экстракту (полученному 1 или 2 способом), содержащему 1 мг вещества, добавляли 400 мкл раствора трифторида бора в метаноле ("Al-drich", США), нагревали в закрытой емкости при 80°С в течение 1 ч. К охлажденной реакционной массе добавляли последовательно по 400 мкл воды и гексана, встряхивали в закрытой пробирке 2 мин, отстаивали в течение 5 мин, собирали верхнюю гексановую вытяжку. Процедуру повторяли. Две гексановые вытяжки объединяли.

Получение силиловых эфиров. К упаренному экстракту (полученному 1 или 2 способом), содержащему 1 мг вещества, добавляли 150 мкл N,O-бис(триметилсилил)трифторацетамида (БТМСФА) ("Supelco", США), нагревали в закрытой емкости при 80°С в течение 30 мин. К охлажденной реакци-

онной массе добавляли 400 мкл МТБЭ, раствор использовали для анализа.

Газовая хромато-масс-спектрометрия (ГХ-МС).

Исследование проводили на хромато-масс-спектрометре модели 6890/5975N фирмы "Agilent Technologies" (США). Хроматографическая колонка: DB-5ms фирмы "Agilent Technologies" (США) диаметром 0.25 мм, с толщиной слоя неподвижной фазы 0.25 мкм и длиной 30 м. Температура инжектора 280°C. Режим инжектора — "без деления потока". Газ-носитель — гелий, скорость потока 40 см/с. Температурный режим программировали: изотерма 70°C в течение 1 мин, нагрев со скоростью 15°С/мин до 320°С и выдержка при данной температуре 15 мин. Температура квадруполя 150°С, ионного источника 230°C, интерфейса 280°C. Объем вводимой пробы 1 мкл. Масс-спектры разделенных веществ регистрировали в режиме электронного удара в диапазоне массовых чисел 34—900 а.е.м.

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). Исследование проводили на жидкостном хромато-масс-спектрометре модели Ac-cella/LTQ Velos фирмы "Thermo Fisher Scientific" (США). Хроматографическая колонка: Hypersil Gold С18 50 x 2 мм с размером частиц сорбента 3 мкм фирмы "Thermo Fisher Scientific" (США). Разделение проводили в градиентном режиме повышения концентрации метанола (с добавлением 0.01% муравьиной кислоты) в водном растворе

Как известно, биологический метод очистки стоков является одним из самых эффективных. В основе данного способа лежат процессы жизнедеятельности микроорганизмов (так называемого «активного ила»), с помощью которых и осуществляется очищение жидкости. Таким образом, активный ил для очистки сточных вод является неотъемлемой частью процесса биологического очищения.

Что это такое?

Активный ил представляет собой комплекс бактерий, необходимых для биологического очищения стоков в специализированных очистных сооружениях.

Активному илу свойственно перманентное увеличение численности микроорганизмов, что не всегда необходимо и может проявляться нестабильным соотношением массы бактерий и поступающих сточных вод.

Принцип работы и что нужно знать

Активный ил формируется коллоидными, взвешенными и растворенными веществами, а также скоростью и качеством процессов окисления.

В то же время процесс окисления зависит от таких факторов, как:

  • концентрация микроорганизмов;
  • температурные условия;
  • продолжительность аэрации;
  • интенсивность насыщения стоков кислородом.

Так как вместе со стоками в емкость попадает питательная для микроорганизмов среда, необходимо контролировать концентрацию загрязнений сточных вод. В противном случае может наблюдаться вспухание или отмирание культур, входящих в состав активного ила.

Возраст

Возрастом активного ила является средняя продолжительность нахождения микроорганизмов в очистном сооружении, которое регулирует соотношение отводимой массы и возвращаемого вещества из вторичных отстойников.

В теории активный ил представляет собой самовоспроизводимую колонию бактерий, однако на практике обновлять комплекс микроорганизмов приходится каждые 5-6 лет.

Состав

Состав активного ила напрямую зависит от концентрации и качества стоков, поступаемых в аэротенк. Компонентами активного ила могут являться:

  • простейшие микроорганизмы;
  • амебы;
  • бактерии;
  • актиномицеты (грибы);
  • инфузории;
  • черви;
  • коловратки.

Бактерии активного ила

При аэробном очищении стоков протекают два основных микробиологических процесса: окисление органического углерода и нитрификация при участии нитчатых, флокулообразующих микроорганизмов и бактерий-нитрификаторов.

Флокулообразующие бактерии отвечают за окисление органических соединений. В их число входят микроорганизмы такого рода, как:

  • Actinomyces;
  • Atcaligenes;
  • Bacillus;
  • Cellulomonas;
  • Desulfotomaculum;
  • Flavobacterium;
  • Mycobacterium;
  • Nocardia;
  • Pseudomonas;
  • Sarcina и другие.

Наиболее многочисленными (до 80 процентов от всего комплекса микроорганизмов) бактериями являются микроорганизмы рода Pseudomonas, способные окислять:

  • спирты;
  • парафины;
  • жирные кислоты;
  • углеводы;
  • ароматические углеводороды.

Микроорганизмы рода Brevibacterium отвечают за окисление:

Окисление алифатических углеводородов происходит за счет бактерий рода Bacillus, углеводородов различных групп –Mycobacterium, а целлюлозы – бактерий рода Cellulomonas.

Палочковидные бактерии рода Zoogloea ramigera выполняют функцию образования полисахаридов хлопьев активного ила.

Углеродоокисляющие нитчатые микроорганизмы представлены:

Нитчатые бактерии отвечают за окисление многочисленных органических соединений и образование каркаса, вокруг которого формируются флоккулы. В то же время эти микроорганизмы являются основной причиной плохого осаждения ила в отстойнике и образования устойчивой пены в устройстве.

При очищении стоков с большим содержанием углеводов и дефицитом азота порой наблюдается интенсивное развитие гетероферментативных молочнокислых бактерий рода Leuconostoc, которые образуют мощную декстрановую капсулу, затрудняющую осаждение ила во вторичном отстойнике.

При недостаточном уровне аэрации развиваются анаэробные процессы с участием микроорганизмов, осуществляющих маслянокислое брожение, сульфатредукцию, денитрификацию и тому подобное.

Денитрификация во вторичных отстойниках приводит к формированию пузырьков азота, что затрудняет устранение ила из сточных вод на выходе из устройства.

Важно: Наиболее активно процессы нитрификации протекают после окисления органической составляющей.

В сточных водах с содержанием серы в активном иле развиваются сульфатредукторы, тионовые и серобактерии (наиболее часто встречаются бактерии рода Thiobacillus). Тионовые микроорганизмы развиваются при условии содержания в стоках восстановленных соединений серы.

При высоком содержании соединений железа в активном иле развиваются микроорганизмы, окисляющие Fe2 (например, рода Ferrobacillus).

Литические микроорганизмы и бактерии-паразиты рода Bdellovibrio присоединяются к клеткам других бактерий, проникают в них и размножаются, что приводит к лизису. Литические микроорганизмы разрушают клетки других бактерий за счет воздействия выделяемых ими литических ферментов.

Из внеклеточных ферментов в активном иле содержатся:

Биомасса активного ила, участвующего в анаэробном разложении, состоит из двух основных групп бактерий:

Первая группа микроорганизмов в качестве питательной среды использует исходную сложную органику, окисляя ее в процессе собственного метаболизма.

Разнообразие видов кислотообразующих микроорганизмов обеспечивает первоначальный гидролиз протеинов, углеводов и липидов до составляющих их аминокислот, сахаров и кислот. В зависимости от преобладания конкретного класса сложной органики, происходит развитие микроорганизмов определенного типа.

Наиболее активное участие в первичном брожении принимают клостридии – микроорганизмы, перерабатывающие все сложные органические соединения. При этом одни их подвиды перерабатывают только протеины, другие – окисляют целлюлозу и другие углеводные вещества, а третьи занимаются разложением жиров.

Данный тип бактерий относится к гидролитикам, так как способствует прохождению основной стадии гидролиза сложной органики.

Вторая группа бактерий обеспечивает сбраживание аминокислот, жирных кислот и сахаров до спиртов и сложных органических кислот, которые также являются промежуточными продуктами в стадии разложения.

Ацетогенные микроорганизмы в результате процессов жинедеятельности продолжают окисление до уксусной кислоты, что влечет за собой выделение молекулярного водорода.

Благодаря разнообразию видов кислотообразующих микроорганизмов жизнедеятельность биоценоза анаэробного ила довольна устойчива к изменению кислотности окружающей среды. В то же время слишком высокое содержание органических кислот способно подавить стадию ацетогенеза — разложение до уксусной кислоты.

Группа метаногенных бактерий именуется по конечному продукту процессов жизнедеятельности – метану.

В большинстве своем группа бактерий представлена метановыми археями нескольких видов, которые в качестве питательной среды используют продукты жизнедеятельности кислотообразующих бактерий.

Образование метана происходит с использованием двух возможных механизмов. При реакции первого типа микроорганизмы окисляют метиловый спирт и уксусную кислоту, выделяя при этом метан и углекислый газ. Реакции второго типа свойственно участие бактерий, использующих выделяющийся в реакциях первого типа углекислый газ, а также водород, образующийся при распаде карбоновых кислот и сложных спиртов. Оба процесса протекают одновременно, в результате чего образуется смесь газов, состоящая на 70 процентов из метана и на 30 – из диоксида углерода.

При большом содержании ионов водорода метаногенные бактерии погибают, в результате чего процесс разложения приостанавливается на стадии накопления жирных кислот, что впоследствии приводит к полному его прекращению.

Если в септике пропал активный ил

Чаще всего выращивание комплекса бактерий осуществляется в аэротенке в теплое время года. Для этого необходимо в емкость налить воду, прошедшую через очистку первой отстойной камеры в количестве до половины от всего объема. Затем вода должна пройти процедуру аэрации и смешаться с массой микроорганизмов. Для постоянного увеличения численности бактерий необходимо регулярно доливать в септик осветленную воду.

Кроме того, проблему могут помочь решить биопрепараты, применение которых позволяет заселить в очистное сооружение колонию необходимых микроорганизмов.

Регенерация

Основная масса комплекса микроорганизмов, отстаивающегося во вторичном отстойнике, должна перекачиваться снова в аэротенк. Ил, попадающий в аэротенк через регенератор, называется циркуляционным. Как показывает практика, во вторичном отстойнике ила собирается больше, чем необходимо для циркуляции, поэтому избыток активного ила утилизируется.

Система регенерации основывается на том, что из общего процесса окисления загрязнений на стадии регенерации выделяются самостоятельные стадии:

  • изъятия сложноокисляемой органики, сорбированной на иле, и полного удаления нерастворенных примесей;
  • активного образования полисахаридного геля.

Важно: Регенератор может быть отдельно стоящим или занимать от одного до трех коридоров аэротенка.

Процент регенерации зависит от объема аэротенков, выделенных под данный процесс. К примеру, если в трехкоридорном устройстве под регенератор выделен лишь один коридор, то система функционирует в условиях 33 процентов регенерации ила.

На современных сооружения биологической очистки вод с высоким содержанием промышленных примесей необходимо выделение под регенераторы как минимум половины общего объема аэротенков.

Применение регенераторов приводит к повышению производительности аэротенков за счет следующих факторов:

  • доза активного ила в регенераторе в 2-3 раза превышает долю ила в аротенке, за счет чего процесс окисления идет с большей интенсивностью;
  • увеличивается число активно функционирующих микроорганизмов, подавленных в аэротенках неблагоприятным воздействием сточных вод;
  • улушаются седиментационные показатели ила за счет снижения удельной нагрузки на ил и улучшения свойств гелеобразующей микрофлоры, флокулообразования и вытеснения нитчатых бактерий;
  • повышенная подача воздуха улучшает перемешивание активного ила и его оснащение кислородом;
  • общая масса и возраст ила в системе с регенератором больше, вследствие чего возможна нитрификация и повышенная устойчивость ила к аварийному сбросу.

Важно: В системах, оснащенными регенераторами, наблюдается уменьшение прироста или и улучшение его влагоотдающих свойств, что имеет существенное значение на стадии удаления избыточного ила.

Для полноценной регенерации активного ила необходимо соблюдение трех основных условий, согласно которым в регенератор:

  • не должны попадать осветленные сточные воды;
  • должен поступать возвратный ил;
  • должно подаваться вдвое больше воздуха, чем в другие коридоры аэротенков.

Также на полноценность процессов регенерации большое влияние оказывает своевременное удаление избыточного активного ила из вторичного отстойника.

Очистка сточных вод с помощью активного ила

Очищение сточных вод с помощью активного ила представляет собой процесс, основанный на способности бактерий использовать загрязнения в качестве питательной среды.

В настоящее время наиболее востребованными в плане очищения сточных вод являются аэробные способы очищения (при участии кислорода). Анаэробные процессы (в условиях дефицита кислорода) распространены менее широко.

Аэробная очистка сточных вод состоит из нескольких стадий:

  • массопередачи кислорода и загрязнений к поверхности активного ила;
  • сорбции загрязнений активным илом;
  • ферментативного гидролиза большинства исходных загрязнений;
  • переноса веществ внутрь клетки;
  • внутриклеточного биохимического окисления загрязнений.

Процесс анаэробного очищения состоит из следующих этапов:

  • трансформация органики в мономерные соединения;
  • переход мономеров в форму короткоцепочных кислот;
  • окисление кислот до состояния уксусной кислоты;
  • образование метана и углекислого газа.

Преимущества и недостатки

Основными преимуществами очистки сточных вод с помощью активного ила является:

  • низкая расчетная стоимость очистки одной единицы стоков;
  • надежность;
  • отсутствие необходимости в регулярной закупке расходных материалов;
  • экологичность;
  • высокая степень очищения (до 99 процентов).

Один кубический метр готового активного ила стоит около 10-13 тысяч рублей. Бактерии для формирования активного ила стоят значительно дешевле – в среднем около одной тысячи рублей за 500 граммов вещества.

Где купить активный ил для очистки сточных вод?

В Москве

Биопрепараты для формирования активного ила можно приобрести в таких компаниях, как:

  • ООО «СитиСтрой»: город Москва, Дмитровское шоссе, дом 157, офис 92133;
  • ООО «ВодаСтокСервис» Московская область, город Лыткарино, промзона Тураево, строение 10;
  • ООО «БИИКС»: город Москва, улица Поклонная, дом 4.

В СПб

Активный ил в готовом виде в Санкт-Петербурге и области поставляет компания «Инжиконстрой», офис которой располагается по адресу: город Санкт-Петербург, Новоколомяжский проспект, дом 15, литер А, помещение 5-Н.

В то же время приобрести препараты для формирования активного ила можно в компаниях:

  • ООО «Сити-Строй»: город Санкт-Петербург, улица Чайковского, дом 21;
  • ООО «Лос24»: город Санкт-Петербург, Приморское шоссе, дом 140, литер К.

Таким образом, активный ил играет большую роль в очищении стоков от органических примесей и позволяет добиться высокой степени очистки стоков — до 99 процентов.

ЛИПИДНЫЙ СОСТАВ АКТИВНОГО ИЛА ПИЛОТНОЙ УСТАНОВКИ АНАЭРОБНОГО ОКИСЛЕНИЯ АММОНИЯ

Исследован липидный состав микробного сообщества активного ила пилотного реактора, осуществляющего анаэробное окисление аммония (процесс анаммокс) на Курьяновских очистных сооружениях. Основная часть жирнокислотного состава (95%) представлена традиционными жирными кислотами С14—C18 как нормального, так и изостроения. В биомассе активного ила установлено наличие липидов, содержащих т.н. ладдерановые вещества ("лестничные" спирты и жирные кислоты), характерные для анаммокс-бактерий: С20-[3]-ладдерановый и С20-[5]-ладдерановый спирты, C18- и С20-[3]-ладдерановая и C18- и С20-[5]-ладдерановые кислоты. Кроме того, в нативном (негидролизованном) экстракте обнаружены простые и сложные эфиры этих веществ с остатками фосфохолина, фосфоэтаноламина, фосфоглицерина. Для некоторых соединений получены и публикуются впервые спектры электронного удара и тандемной масс-спектрометрии.

Издание: Прикладная биохимия и микробиология
Год издания: 2013
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2013.-N 5.-С.481-490. Библ. 14 назв.
Просмотров: 23

Читайте также:  Медные наконечники для проводов
Оценить статью
Добавить комментарий